細胞培養步驟:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
公司向您NR8383大鼠肺泡巨噬細胞廠家的詳細說明:
產品名稱 | NR8383大鼠肺泡巨噬細胞廠家 |
規格 | T25m2 |
貨號 | YS-X6352 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發貨:客戶可根據自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養瓶和相應的細胞密度。發貨的新鮮細胞還包含:1、發貨的T25方瓶中裝滿50ml左右培養基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養箱內靜置后2-3h,再進行后續的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
細胞株的培養和傳代培養:
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10%小牛血清和抗生素的培養液中,培養對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5% CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養,根據細胞生長特性,在適當的時候進行傳代,一般3~4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代:
直接離心后吸去培養上清液,用新鮮培養液稀釋懸浮細胞,一般按1:2-1:5 稀釋細胞后,分瓶繼續培養。
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實驗操作步驟:
a.采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b.立即在無菌超凈臺內用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25% 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個,細胞培養瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
苯酸諾龍硼酸 99.5%,用于電泳鄰苯二酸二(2-氧基)酯 94%Nosema apis
二苯基-(2-醇硼酸 分子生物學級, ≥99.5% (T)烯基三基錫 97%Nosema ceranae
硼酸 用于細胞培養和植物細胞培養, ≥99.5%基三氯化錫 95%Nosema spp.
酸素硼酸 99.998% metals basis氧化二辛基錫 98%Nuclear Polyhedrosis Virus(NPV)
鎢酸銨 99.99% (metals basis)六正基二錫 98%Ochroconis gallopava
紫香苷鎢酸銨 AR,99%六基苯 98%Oesophagostomum clumbianum
紫草酸仲鎢酸銨 99.95 %芬苯達唑 分析標準品Oncorhynchus Masou Virus(OMV)
紫草素 三氧化鉻 AR,99%芬苯達唑 98%Orf Virus(ORFV)
梓醇三氧化鉻 CP,98%托品酸 98%Orientia tsutsugamushi
三氧化鉻 ACS剛果紅 AROrnithobacterium rhinotracheale
NR8383大鼠肺泡巨噬細胞廠家 BC N-烯基己內酰胺蝸牛粘液提取物Human KLF10(Krueppel-like factor 10) ELISA Kit
Human KLK8(Kallikrein-8) ELISA Kit
5-氮胞苷 98% 2',4'-二氯苯酮鱉提取物Human F12(Coagulation factor XII) ELISA Kit
Human MKL1(MKL/myocardin-like protein 1) ELISA Kit
6-氯核苷 97% 3,5-二基-4-羥基苯醛蛇鞭提取物Human MLK4(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 21) ELISA Kit
Human MLKL(mixed lineage kinase domain-like) ELISA Kit
5-氮胞嘧啶 98% 1-(對苯磺酰)咪唑低溫Human COX-2(Cyclooxygenase-2) ELISA Kit
Human PRDX5(Peroxiredoxin-5, mitochondrial) ELISA Kit
核苷酸5’-一磷酸腺苷鈉鹽 99% 硫代肼羊蹄殼提取物Human MUC2(Mucin-2) ELISA Kit
Human TLR9(Toll-like receptor 9) ELISA Kit
腺嘌呤 98% 2-羥基異蠶沙Human HPA(Heparanase) ELISA Kit
Human OPRM1(Mu-type opioid receptor) ELISA Kit
腺嘌呤 ≥99.5% (HPLC) 二醇二縮水甘油醚貓用風味料Human G6PD(Glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase) ELISA Kit
Human NPPC(C-type natriuretic peptide) ELISA Kit
腺嘌呤核苷 用于細胞培養,>99.5%(HPLC) 對氧基苯硼酸貓用風味料Human OAS2(2'-5'-oligoadenylate synthase 2) ELISA Kit
Human TTR(Transthyretin) ELISA Kit
腺嘌呤核苷 分析標準品 5-二苯并環庚烯酮貓用風味料Human DSG1(Desmoglein-1) ELISA Kit
Human CEBPE(CCAAT/enhancer-binding protein epsilon) ELISA Kit
腺嘌呤核苷 超純級,99.5% 貓用風味料Human PROC(Vitamin K-dependent protein C) ELISA Kit
Human PROZ(Vitamin K-dependent protein Z) ELISA Kit


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