使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品名稱 | 白術PCR鑒定試劑盒說明書 |
英文名稱 | Rhizoma atractylodis macrocephalae |
貨號 | YSP8538 |
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PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。
粘溴酸 99% 亞異基二酸二酯桉樹葉提取物Human CTSL1(Cathepsin L1) ELISA Kit
Human C4A(Complement C4-A) ELISA Kit
酰溴 95% 4-氯苯酰酸酯根蓮解毒散Human CKM(Creatine kinase M-type) ELISA Kit
Human EDN1(Endothelin-1) ELISA Kit
皂土(膨潤土) Bentone SD-1,適于中至低極性溶劑 3,4-亞基二氧芐肼對氯苯硼酸Human SOD1(Superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit
Human CASP9(Caspase-9) ELISA Kit
皂土(膨潤土) Bentone SD-2,適于中高極性溶劑 2,4,6-三氟苯腈新良蛋糕粉Human NAMPT(Nicotinamide phosphoribosyltransferase) ELISA Kit
Human BMP-6(Bone morphogenetic protein 6) ELISA Kit
BENTONE 27,應用在中等到高等極性溶劑 2,4-二基-3-吡咯羧酸酯垂盆草提取物Human CD28(T-cell-specific surface glycoprotein CD28) ELISA Kit
Human CD44(CD44 antigen) ELISA Kit
皂土(膨潤土) BENTONE 38,應用在極性溶劑體系中 3,5-二基-1H-吡咯-2-酸酯苦杏仁苷Human C7(Complement component C7) ELISA Kit
Human Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2) ELISA Kit
鋅粒 99.99% metals basis [(苯硫基)亞基]雙(三環己基膦)二氯化釕迷迭香酸Human CD86(T-lymphocyte activation antigen CD86) ELISA Kit
Human LPA(Lipoprotein a) ELISA Kit
二苯基二硒 99% 2,4-二氯-5-氟苯醇二楊梅素Human C3(Complement C3) ELISA Kit
Human CP(Ceruloplasmin) ELISA Kit
99% 2-氰基-4-氧基苯醛科羅索酸Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) ELISA Kit
Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) ELISA Kit
鹽酸鹽 ≥99.0% (HPLC) 6-氨基吲哚-1-酸叔酯芹菜素Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) ELISA Kit
Human BAX(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit
白術PCR鑒定試劑盒說明書A Beta1-40 ELISA Kit 大鼠β淀粉樣蛋白1-40氨基聚苯烯微球 diameter 5.0-5.9μm,5% w/v 二溴雙(三苯基磷)化鎳 99%Klebsiella pnenmoniae
8-OHdG(Mouse 8-Hydroxy-desoxyguanosine) ELISA Kit 小鼠8羥基脫氧鳥苷氨基聚苯烯微球 diameter 6.0 - 6.9μm,5% w/v(S, S)-環己二胺 98%Klebsiella spp.
8-OHdG(Human hydroxylysine) ELISA Kit 人8羥基脫氧鳥苷氨基聚苯烯微球 diameter 7.0 - 7.9μm,5% w/v(R, R)-環己二胺 98%Koi Herpesvirus(KHV)Sph
8-OHdG ELISA Kit 大鼠8羥基脫氧鳥苷氨基聚苯烯微球 diameter 8.0 - 8.9μm,5% w/v 2-(二苯基膦基)苯酸 97%Koi Herpesvirus(KHV)
8-iso-PG(Mouse 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 小鼠8異前列腺素氨基聚苯烯微球 diameter 9.0 - 9.9μm,5% w/v 2-(二苯基膦基)胺 95%Kudoa septempunctata
8-iso-PG(Human 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 人8異前列腺素氨基聚苯烯微球 diameter >10μm ,2.5% w/v2-(二-叔基膦)-2'-(N,N-二基氨基)聯苯 98%Lactobacillus salivarius
8-iso-PG ELISA Kit 大鼠8異前列腺素羧基聚苯烯微球 diameter 0.05 - 0.1μm ,2.5% w/v 2-二環己基磷-2',4',6'-三異基聯苯 97%Lactococcus lactis
8-epi-PGF2 Alpha(Human 8-epi-prostaglandin F2alpha0 ELISA Kit 人8-異構前列腺素F2α羧基聚苯烯微球 diameter 0.2 - 0.5μm ,2.5% w/v 4,4'-二基-2,2'-聯吡啶 98%Lactococcus spp.
8-epi-PGF2 Alpha (Rabbit 8-epi-prostaglandin F2alpha) ELISA Kit 兔8-異構前列腺素羧基聚苯烯微球 diameter 0.6 - 1.0μm,2.5% w/v2-雙環己基膦-2',6'-二氧基聯苯 95%Lawsonia spp.
6-OHDA(Human 6-hydroxydopamine) ELISA Kit 人6-羥多巴胺羧基聚苯烯微球 diameter 1.0 - 1.9μm,5% w/v(1,5-環辛二烯)二氯化鈀(II) Pd 37.3%legionella pneumophila
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR





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